Читать книгу - "Александр Александрович Максимов - Василий Николаевич Манских"

они полностью были вытеснены азур-эозином. В докторской диссертации Максимова упоминается также окраска по Ф. Германну – сафранином (1 г на 90 мл анилиновой воды[75] + 10 мл спирта, 24–48 часов, дальше вода, кислый спирт и абсолютный спирт по Флеммингу) с генцианвиолеттом (1 г на 90 мл анилиновой воды +10 мл спирта, 3–5 минут) и йодом по Граму (1–3 часа, с последующей дифференцировкой спиртом до фиолетового цвета с коричневым тоном) после фиксации по Подвысоцкому. Более подробное описание этого редкого метода можно найти в подлиннике работы, на которую ссылается Максимов [163]. По сути, он является вариантом окраски ядерных структур по Флеммингу (см. у Б. Ромейса [100, 183]).

Тотальные препараты из культур соединительной ткани после фиксации по Карнуа Максимов предпочитал окрашивать слабым раствором гематоксилина Делафильда, оставляя культуральные покровные стекла плавать на его поверхности культурой вниз на 24 часа {57}, после чего сутки отмывал в воде, слабо подкрашивал эозином и заключал в бальзам.

Пожалуй, наиболее часто Максимов использовал метод окраски железным гематоксилином по Гейденгайну, конечно, ввиду своих универсальных цитологических возможностей. Он применял ее (после фиксации сулемой[76] и сулемовыми смесями) как обзорную окраску для выявления клеток соединительной ткани на срезах и в пленках и для обнаружения клеточных органелл (после сулемы – для окраски центросом, реже, после ценкер-формол-осмия – для митохондрий). Пропись этой окраски в том виде, как она практиковалась в лаборатории Максимова, можно найти в диссертации Н. П. Солухи.

«С гематоксилином (EH) поступают следующим образом: приготовляют водный 0,5 % раствор гематоксилина и оставляют его „зреть“ дней на 20. Препарат предварительно окраски гематоксилином протравляется часов 12–20 в 1 1/2% водном растворе амьячно-железных квасцов (Ferrum sulfuricum ammoniatum axydatum), затем промывается быстро в дистиллированной воде и оставляется в растворе гематоксилина часов на 24 или 48. После этого препарат быстро промывают в дистиллированной воде и обесцвечивают в том же растворе железных квасцов, причем степень обесцвечивания контролируется под микроскопом. Затем следует тщательно промыть в проточной воде и провести через спирт, масло[77], ксилол и бальзам» [112, C. 14].

У Солухи мы можем обнаружить и описание окраски полихромной метиленовой синью по Унна – метода, также использовавшегося Максимовым в работах о воспалении {28, 31}.

«Полихромной синькой (Methylenblau nach Unna от [фирмы] Grübler’a)[78], (Mb) предварительно фильтрованной красят Z [фиксированные семьсю Ценкера] препараты в течение 24 часов, Zf [фиксированные максимовским ценкер-формолом]-препараты – 20 минут, и фиксированные жидкостью Dominici[79] 5 или 10 минут. После окраски препарат промывают водой и быстро (1/2 минуты) дифференцируют в свежеприготовленном растворе глицериново-эфирной смеси Unna[80] в воде – несколько капель на часовое стеклышко воды, после чего препарат хорошо промывают в воде, так как следы оставшейся глицерино-эфирной смеси могут со временем обесцветить уже готовый окрашенный препарат при его дальнейшем хранении. Промывать достаточно минут 15 с частой меной воды. Затем препарат обезвоживают 96° спиртом, переносят в бергамотовое масло и проводят через ксилол в бальзам» [112, C. 14].

Для окраски коллагена в ранних работах Максимов использовал хорошо известный метод ван Гизона (с гематоксилином Вейгерта, после фиксации смесью Ценкера) {22}, в поздних – азан Гейденгайна после ценкер-формола {82, 90}. Ретикулин он окрашивал (импрегнировал) после ценкер-формола по Бильшовскому, эластику – орсеином с докраской гематоксилином {82, 90}. Особенности применения этих методов в максимовской лаборатории неизвестны, возможно, они выполнялись так, как описано в книге С. С. Чашина [47].

Митохондрии (хондриосомы) Максимов предпочитал окрашивать по методу Кулля после фиксации по Шампи – кислым фуксином Альтмана на анилиновой воде[81], тионином и ауранцией (в ранних работах применялся также обычный метод Альтмана) {57–60, 78}, описание которого можно найти в любом крупном руководстве ХХ в. по микроскопической технике. Результат метода очень красив – митоходрии окрашиваются в насыщенно-красный цвет, ядра – в светло-фиолетовый – и все это на фоне бледно-желто-коричневой цитоплазмы и межклеточных структур. Проблема воспроизведения этой методики заключается в том, что достать оранжево-желтую краску – ауранцию – сегодня практически невозможно[82]. В диссертации Максимова упоминается также метод Бенда (см. у Б. Ромейса [100, 183]), но далее он им практически не пользовался (вероятно, из-за капризности процедуры).

«Сетчатый комплекс» Гольджи Максимова интересовал мало. В его работах есть лишь три оригинальных рисунка этой органеллы, выявленной импрегнацией осмием (правда, два из них по-своему уникальны, поскольку изображения аппарата Гольджи, окрашенного классическими методами в лимфоидных клетках, найти очень трудно) {88}. На одном из этих рисунков показан препарат лимфоидных клеток с одновременной окраской митохондрий и «сетчатого комплекса». Этот препарат был приготовлен с помощью импрегнации осмием по методике Колачева – Насонова (см. руководства по микротехнике [100, 183]) в комбинации с методом Кулля.

Гистохимические методы в работах Максимова весьма немногочисленны. Мелкие жировые капли в клетках он выявлял, применяя методы фиксации в растворах, содержащих осмий (жидкости Под-высоцкого, Альтмана, Шампи, ценкер-формол-осмий), при которых жир окрашивается в черно-коричневый цвет и хорошо сохраняется на препаратах после заливки в парафин или в целлоидин. Для окраски крупных жировых включений Максимов использовал шарлах красный (это то же самое, что и судан IV) и нильский синий после фиксации формалином {57}. Плазмоциты он выявлял метиловым зеленым-пиронином {22}. Эти методы им не описаны, но, по-видимому, они мало отличались от тех прописей, которые можно найти в микротехнических руководствах [47, 48, 54, 100, 183]. То же относится и к выявлению амилоида окраской метиловым фиолетовым после фиксации этанолом {2, 3, 10} и муцинов – толуидиновым синим (после фиксации сулемой) {21}, с тем лишь замечанием, что препараты следует обязательно рассматривать в капле воды, поскольку диагностически значимое явление метахромазии проявляется в воде значительно ярче, чем после процедуры заключения в бальзам.

В работах по туберкулезу Максимов прибегал и к окраске микобактерий по Цилю – Нильсену. Он нагревал наклеенные целлоидиновые срезы в фуксине Циля на малом пламени спиртовки до появления паров, оставлял остывать на 30 минут, затем дифференцировал в 1 % соляной кислоте на 70° спирте 30 секунд, 10–24 часа отмывал от кислоты в воде, еще сутки докрашивал разведенным гематоксилином Делафильда, отмывал от него в воде 10–20 часов, окрашивал азур-эози-ном и заключал в бальзам {70, 75}. Банальные бактерии (стафилококки) при исследовании гнойного воспаления он окрашивал обычным способом Грама и полихромной метиленовой синью по Унна {28}.

К методике Эрлиха – Бионди («триацидная смесь» растворов метилового зеленого, кислого фуксина и оранжа Ж), ныне забытой, а тогда очень распространенной гематологической и в меньшей степени обзорной окраске Максимов прибегал очень редко {21}. Этот исторический метод (которым П.